高效液相色譜法HPLC又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。它在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、化學(xué)鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測(cè)器等新實(shí)驗(yàn)技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。

特點(diǎn)：①高壓;②高速;③高效;④高靈敏度;⑤應(yīng)用范圍廣;⑥柱子可反復(fù)使用;⑦樣品量少、容易回收.

氣相色譜GC分析是指流動(dòng)相為氣體的色譜分析法。氣體和易于揮發(fā)的液體或固體 等試佯都可用氣相色譜分析進(jìn)行分離和測(cè)定。

特點(diǎn)：①分析速度快;②選擇性好;③分離效能高;④靈敏度高;⑤應(yīng)用范圍廣。

二手高效液相色譜分析法(HPLC)，它的基本概念及理論基礎(chǔ)（如保留值、塔板理論、速率理論、容量因子、分離度等），與二手氣相色譜GC是一致的，但又有不同之處：

分析對(duì)象的區(qū)別

GC：適于能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品;但對(duì)高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、 熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品，尤其對(duì)大多數(shù)生化樣品不可檢測(cè) 占有機(jī)物的20%

HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品(包括有機(jī)介質(zhì)溶液)，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，對(duì)分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測(cè) 用途廣泛，占有機(jī)物的80%。

進(jìn)樣方式的不同,高效液相色譜HPLC只要將樣品制成溶液，而氣相色譜GC需加熱氣化或裂解。

流動(dòng)相差別的區(qū)別

GC：流動(dòng)相為惰性，氣體組分與流動(dòng)相無親合作用力，只與固定相有相互作用。

HPLC：流動(dòng)相為液體，流動(dòng)相與組分間有親合作用力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對(duì)分離起正向作用。且流動(dòng)相種類較多，選擇余地廣，改變流動(dòng)相極性和pH值也對(duì)分離起到調(diào)控作用，當(dāng)選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相也可以增大分離選擇性。

流動(dòng)相的不同，在被測(cè)組分與流動(dòng)相之間、流動(dòng)相與固定相之間都存在著一定的相互作用力.

操作條件差別

GC：加溫操作

HPLC：室溫;高壓(液體粘度大，峰展寬小)

二手高效液相色譜HPLC是在液相中進(jìn)行，對(duì)被測(cè)組分的檢測(cè)，通常采用靈敏的濕法光度檢測(cè)器，例如，紫外光度檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、熒光光度檢測(cè)器等；

二手高效液相色譜HPLC的定性和定量分析，與二手氣相色譜GC分析相似，在定性分析中，采用保留值定性，或與其他定性能力強(qiáng)的儀器分析法連用；在定量分析中，采用測(cè)量峰面積的歸一化法、內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法等，但高效液相色譜在分離復(fù)雜組分式樣時(shí)，有些組分常不能出峰，因此歸一化法定量受到限制，而內(nèi)標(biāo)法定量則被廣泛使用。

此外二手高效液相色譜HPLC還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長，相互補(bǔ)充。二手高效液相色譜LPLC的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等）中，如果流動(dòng)相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。二手高效液相色譜檢測(cè)器HPLC的靈敏度不及二手氣相色譜GC。